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Juan Pablo PETITI

Profesor Asociado Centro de Microscopía Electrónica Facultad de Ciencias Médicas Universidad Nacional de Córdoba (UNC) Investigador Adjunto CONICET

Microscopía Correlativa (CLEM) como herramienta indispensable para estudiar procesos dinámicos en células tumorales

Resumen

En los últimos años, las investigaciones relacionadas con la salud humana han incorporado cada vez más el estudio de mecanismos subcelulares que regulan las principales respuestas biológicas de las células. En este sentido, la determinación de la expresión, localización y tráfico de proteínas ha llevado a una mejor comprensión del comportamiento de las poblaciones celulares, paso necesario para la identificación de nuevos blancos terapéuticos en patologías humanas. La compartimentalización de reacciones y procesos bioquímicos en organelas y la comunicación entre ellas a través de sitios de contacto de membrana son esenciales para la homeostasis celular y constituyen un área de interés relevante y novedoso en la biología de células tumorales. Los continuos avances en microscopía de alta resolución como así también en la preparación de muestras, específicamente en microscopía electrónica, han permitido comprender y analizar a escala nanométrica la participación de la comunicación entre organelas en el comportamiento de las células tumorales.

La técnica de microscopía electrónica (ME) requiere la fijación de las células, dando por resultado imágenes estáticas con información limitada de procesos dinámicos. Para cerrar la brecha entre live-cellimaging y la ME, se han desarrollado numerosas metodologías de microscopía correlativa (CLEM: Correlative Light and ElectronMicroscopy) (NatMethods. 2008, 5: 973-8027; NatProtoc. 2017, 12:916-946) que combina las ventajas de cada tipo de microscopía para resolver una misma pregunta. La microscopía correlativa puede combinar la información de la microscopía de fluorescencia con la alta resolución de la microscopia electrónica, permitiendo así analizar procesos dinámicos a una escala nanométrica. En este sentido la microscopía de fluorescencia proporciona la información funcional en células vivas, que luego de ser fijadas y procesadas para ME pueden ser relocalizadas y estudiadas a una resolución nanométrica, revelando así los detalles ultraestructurales de los hallazgos funcionales.

En esta charla presentaré resultados de nuestro laboratorio y los obtenidos en el laboratorio de la Dra. Graca Raposo, Cell Biology and CancerUnit (UMR144), del Institut Curie,utilizando diferentes estrategias de CLEM para estudiar el tráfico de receptores y la interacción entre organelasimplicadas en la regulación de la secreción hormonal en células tumorales adenohipofisarias.

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